应用多重RT-PCR检测草莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒 图文

段时。合理选择引物后,不能良好地扩增是多重5,总体来讲,提高,而增加延伸时间、降低PCR缓冲液浓度可能增加长扩增产物的量。在本研究中,单独增加某对引物的量对反应的影响较复杂,该引物对应的扩增产物未必增加,且易引起其它扩增片段的缺失或弥散,即使扩增产物增加了,其重复性也不好。只有当其它因子较适合时,再调节引物的量才有较好的效果。图和多重PCR检测草莓微茎尖组培苗DL2000;1~11:通过微茎尖培养获得的草莓品种宝交早生的11个株系。a:利用单一PCR检测SMoV;b:利用单一PCR检测SMYEV;c:利用多重PCR检测SMoV和SMYEV。Fig.2 StrawberrymicroplantsarisenfromminishoottipculturewerescreenedforviruseliminationbystandardRT-PCRandmultiplexRT-PCRM:DNAmarkerDL2000;1-11:Elevenlinesobtainedbyminishoottipcultureofstrawberrycultivar‘Hokowase’;a:ThedetectionofSMoVbystandardRT-PCR;b:ThedetectionofSMYEVbystandardRT-PCR;c:ThedetectionofSMoVandSMYEVbymultiplexRT-PCR. 多重PCR比单一PCR中的退火温度低4~6℃一般有更好的扩增效果,短扩增条带弱或缺失多采用降低退火温度来解决〔5〕,而本研究中提高退火温度反而增加了弱带的亮度,这可能在于高的退火温度抑制了长内标片段的扩增,从而利于短片段的扩增。参考文献:1 杨洪一,张志宏,杜国栋,代红艳,高秀岩.利用内标为基础的RT2PCR技术检测草莓斑驳病毒.植物病理学报,2005,35(2:116~122