剂与阻遏蛋白结合,促使阻遏蛋白与操纵基因分离;另一方面,细胞中cAMP浓度升高,cAMP与CRP结合并使之激活,CRP与启动基因结合并促使RNA聚合酶与启动基因结合,基因转录激活。4、作为分子克隆的载体,一般应具备那些条件?(9分)答:(1)在合适的位置具有至少一个多克隆位点,供外源DNA插入以形成重组体分子。(2)克隆载体能携带外源DNA片段进入受体细胞,或停留在细胞质中能自我复制,或整合到染色体DNA上随染色体DNA的复制一起被复制。(3)克隆载体必须具有用于选择克隆子的标记基因。(4)克隆载体必须是安全的,不应含有对受体细胞有害的基因,并且不会任意转入受体细胞以外的其他生物细胞,尤其是人的细胞。六、论述题:(15分)试述基因芯片的工作原理及其在生物学研究中的意义。原理:基因芯片的工作原理与经典的核酸分子杂交方法一致,都是应用已知核苷酸序列作为靶基因与互补的探针核苷酸序列杂交,通过随后的信号检测进行定性与定量分析。具体讲即是将许多特定的寡核苷酸片段或cDNA基因片段作为靶基因,有规律地排列固定在支持物上;样品DNA/RNA通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子或放射性同位素作为探针;然后按碱基配对原理将两者进行杂交;再通过荧光或同位素检测系统对芯片进行扫描,由计算机系统对每一探针上的信号检测和比较,从而得出所需要的信息。生物学研究中的意义:(1)用于绘制基因缺失图谱和进行基因表达分析;(2)用于基因突变研究;(3)用于病毒病原体的检测和基因分型;(4)用于细菌检测;(5)用不同细胞周期发育阶段的cDNA作探针系统性地研究细胞中任意时期特异表达的基因;(6)能了解某些基因对特定生长发育阶段的重要性;(7)基因芯片还可用于进行基因诊断,可建立正常人特定组织、器官的基因芯片,给出标准杂交信号图;(8)用病人的可疑cDNA作探针与之杂交,检查哪些基因的表达受抑制或激活。
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