机上洗涤5遍(用洗液将反映孔完全加满,静置30S,共洗涤5遍,洗完后孔上方及底部不应残存液体,禁止在滤纸上拍干)。Р5、每孔加酶结合物100ul,取新粘胶纸覆盖反应板,37±2℃孵育30min。Р6、同步骤4。Р7、每孔加入底物缓冲液50ul,TMB50ul,混匀,不必覆盖粘胶纸,37±2℃孵育10min。Р8、每孔加入50ul 1M硫酸终止反应,充分混匀。Р9、在2h内置于酶标仪读数,单波长450nm,或双波长450/630nm测OD值。Р(三)试验结果Р1、NC≤0.02Р2、Cut off值=0.1+NC=0.12Р3、标本OD值小于Cut off为阴性,大于或等于Cut off为阳性Р(四)报告:对呈阴性反应的样品,可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告;对呈阳性反应的样品,须进行复检,不能出阳性报告。Р二、上海科华生物Р【方法】双抗原夹心酶联免疫法Р【原理】本试剂盒采用HIV特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板,用gp36、gp41标记辣根过氧化物酶、采用双抗原夹心法捕获人血清、血浆标本中的HIV(1+2)抗体。Р【HIV筛查试验操作程序】Р试验前准备:Р试验开始前将试剂和样品放置于室温(18~23℃)半小时。Р换隔离衣,戴好帽子、口罩、双层手套。Р缓冲液配制:用蒸馏水1:25倍稀释,现用现配。或液体内有结晶,应放置在37℃直至溶解。Р试验操作:Р1、装好所需使用数目的孔条。设空白对照孔2孔,2个阴性对照孔,3个HIV-1阳性对照孔。Р2、每孔加入100ul待检样品及对照(对照要后加),可振摇15S。Р3、覆盖粘胶纸,37±2℃孵育60±2min。Р4、置洗板机上洗涤5遍(用洗液将反映孔完全加满,静置30S,共洗涤5遍,洗完后孔上方及底部不应残存液体,禁止在滤纸上拍干)。Р5、每孔加酶结合物100ul,取新粘胶纸覆盖反应板,37±2℃孵育30min。
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