.5,这只是一个理论值。Р 打了这么多字,只解释了纠结的第一个方面。好吧,我们再说说第二个方面。Р 为什么我们在实际探索最佳标记PH的时候,有的蛋白最佳标记PH并不符合这个规律?有的蛋白随着标记PH的升高反而表现出更强的特异性反应,或者特异性反应强度出现抛物线样的变化,或者······Р 我们在解释PI+0.5时,并没有引入配价结合参与标记过程的机理。蛋白的半胱氨酸残基可以通过硫基与胶体金表面形成配位键,而这种结合作用力是非常强的,完全可以打乱上述规律。比如一个蛋白的氨基酸序列中含有相对较多的半胱氨酸残基,而这些残基分布在序列的多个位置上,牢固的吸附于胶体金表面,这样蛋白的特异性表位可能很难暴露出来。如果采用较高的标记PH,当斥力占绝对优势时,蛋白特异性表位将会暴露出来。反应在表观上,就是在一定范围内,标记PH越高,特异性反应越强。如果一个蛋白含有非常多的半胱氨酸残基,由于强大的配位键结合力,将会导至金标记物互相吸附,进而凝集、蓝变甚至沉淀。这可以解释,为什么有的抗原纯度虽然很高,也不含有干扰成分,但即使采用很高的标记PH,也无法标记成功。将抗原加入胶体金溶液中,即发生蓝变。Р 另外一个典型的可以说明配位键对标记效果影响的例子是:硫柳汞,这也是胶体金产品中忌讳该防腐剂的原因。Р 此时,我们会发现配价结合作用力与其它作用力对标记效果的影响,有时候会产生矛盾,而互相矛盾的作用力共同作用一个反应的时候,可能会出现抛物线样的性能表象。在抛物线的前后位置,代表了某种作用力更占优势,而在抛物线的顶端,是各种作用力的平衡点。Р 在查阅文献资料的时候,我们还可能会看到一种说法,关于标记蛋白大致可以分为三类:PH非依赖型、PH非严格依赖型、PH严格依赖型。之所以有这种说法、出现这些现象,与三种作用力的共同作用有关。对于PH非依赖型和非严格依赖型往往与蛋白的氨基酸序列中含有相对较多的硫键有关。
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