灭菌的培养皿分别编号(在皿盖上注明1,2,3,4号字样)后放在操作台面的湿纱布上,用移液器取无菌水1 mL加入到每一个培养皿中。把消毒的组织移入第一个培养皿中,用灭菌的玻棒研碎或用剪刀剪碎,制成细菌悬浮液。用灭菌的接种环从第一皿取一环细菌悬浮液至第二皿中,按此法直至稀释至第四皿。Р ④倒培养基:在编号为2,3,4的培养皿内倒入已融化并冷却到45℃的牛肉膏蛋白胨培养基,在桌面上轻微晃动培养皿,使细菌悬浮液与培养基混合均匀。Р ⑤培养:待培养基凝固后,将培养皿翻转置于28℃恒温培养箱中培养,逐日观察病菌生长情况。Р (2)平板画线分离法Р ①准备细菌悬浮液:同上述稀释分离法。Р ②制作平板培养基:将牛肉膏蛋白胨培养基倒入灭菌的培养皿中,待其完全凝固后使用,在培养皿上注明材料名称、分离人姓名和分离日期。Р ③划线:用灭菌的接种环蘸取悬浮液在平板培养基上的边缘来回划线5 ~ 6次,将接种环在火焰上灭菌,旋转平板60°角左右,从第1次划线的末端再划线5 ~ 6次,如此重复4 ~ 5次。注意每次划线后在火焰上灭菌接种环,否则难以出现Р 单一的细菌菌落。Р ④培养:翻转培养皿放在28℃的恒温培养箱中培养,逐日观察细菌生长情况。Р 3、植物病原细菌的纯化Р 挑取上述分离获得的单一细菌菌落,在平板培养基上按上述方法划线纯化,或将单菌落细菌配成细菌悬浮液后划线纯化,按同样的方法重复三次。如菌落的形态特征都一致,则表明获得了植物病原细菌的纯培养,保存备用。Р 实验四病原物的接种技术Р 【实验目的】Р 学习和掌握植物传染性病害研究中常用的接种方法。Р 【实验原理】Р 从病植物上分离的微生物,不一定都是具有致病性的病原物,其中不少是腐生性的。只有通过接种植物体,才能确定它的致病性。植物病害的发生是由病原物、寄主植物和环境条件共同作用的结果,同时和接种的成功与否密切相关。所以一定要采用合理的接种方案。
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