也有的研究者也用碱性缓冲液测定脲酶。测定土壤脲酶均采用尿素做基质,浓度范围为2——10%。Р (三)试剂配制Р 1、PH6.7柠檬酸缓冲液:取368g柠檬酸溶于600ml蒸馏水中,另取259g氢氧化钾溶于水,再将二种溶液混合,用1NNaOH讲PH调至6.7,并用水稀释至2L。Р 2、苯酚钠溶液:称62.5g苯酚溶于少量乙醇中,加2ml甲醇和18.5ml丙酮,然后用乙醇稀释至100ml(A液),保存在冰箱中,称27g氢氧化钠溶于100ml水中(B液),保存在冰箱中,使用前,取A、B两页各20ml混合,并用蒸馏水稀释至100ml备用。Р 3、次氯酸钠溶液:用水稀释制剂,至活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定。Р 4、10%尿素液。Р 5、甲苯Р 6、氮的标准溶液:精确称取0.4717g硫酸铵溶于睡并稀释至1000ml,则得1ml含0.1mg氮的标准液,绘制标准曲线时,可将此液稀释10倍供用。Р (四)实验步骤Р 1、标准曲线的绘制:吸取西式10倍的标准液0、1、3、5、7、9、Р11、13ml,移于50ml比色管中,然后加蒸馏水20 ml。先加4 ml苯酚钠溶液,再立即加入3 ml次氯酸钠溶液,每加入一种试剂后均将混合物仔细混合。20分钟后显色,1h 内在分光光度计上于578nm处比色,制作标准曲线。Р 2、操作过程:取相当于5g 新鲜土壤置于100ml广口三角瓶中,加1ml甲苯。15分钟后加10ml 10%尿素液和20ml PH6.7柠檬酸盐缓冲液。摇匀封口后在370C恒温箱中培养24h.取出过滤,过滤后取3ml滤液注入50ml比色管中,然后按绘制标准曲线显色方法进行闭塞测定,实验需设无基质对照和无土壤对照,无基质对照用水替代。Р 3、结果计算:脲酶活性以24h后1g突然中氨基氮的含量表示。Р NH3----N(ug) =a*10/5g —土壤含水量Р a ——测得的氨基氮的含量
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