糖核酸酶在除去变性剂和还原剂后,能自动折叠成天然构象,形成正确的四对二硫键,并恢复几乎全部的生物活性。(但从目前的研究来看,细胞内新生肽的折叠从一般意义上说是需要分子伴侣和酶帮助的,而不是自发进行的。)Р5.如何运用DNA序列分析方法确定DNA序列中与蛋白质结合的区域。Р用足迹法就可以!Р 又称为足印法(footprinting)是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法。用于检测与特定蛋白质结合的DNA序列的部位,可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合区域。其原理为:DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解,在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区),从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移出与蛋白质结合的DNA后,又可测出被结合处DNA的序列。Р6.有一酶的粗提液,其中含有分子量和带电荷状况都不同的几种酶,请设计两种不同的方法将它们分离纯化,并简述各方法的原理。Р分子筛层析:也称凝胶过滤法, 其原理是:当不同分子大小的蛋白质流经凝胶层析柱时,比凝胶孔径大的分子不能进入珠内网状结构,而被排阻在凝胶珠之外随着溶剂在凝胶珠之间的孔隙向下移动并最先流出柱外;比网孔小的分子能不同程度地自由出入凝胶珠的内外。这样由于不同大小的分子所经的路径不同而得到分离,大分子物质先被洗脱出来,小分子物质后被洗脱出来。РSDS-PAGE,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理是当SDS与蛋白质结合后,蛋白质分子即带有大量的负电荷,并远远超过了其原来的电荷,从而使天然蛋白质分子间的电荷差别就降低乃至消除了,与此同时蛋白质在SDS作用下结构变得松散,形状趋向一致,所以各种SDS-蛋白质复合物在电泳时产生的脉动率差异,就反映了分子量的大小。Р离子交换层析:是一种以离子交换树脂作支持剂的层析法,离子交换树脂具有酸性或碱性基团,当溶液中含有酸性或碱性的离子时,就可以与离子交换树脂上的酸性或碱性基团
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