的分离方法, Percoll 分离液法是一种连续密度梯度离心分离法。 2、淋巴细胞与单核细胞分离经分离后的 PBMC 中主要是单核细胞与淋巴细胞, 少量血小板与 RBC ( RBC 可用 NH4C l 或低渗法去除,血小板可多次离心去除) 单核细胞去除可以利用单核细胞粘附玻璃、塑料和葡聚糖的特性以及吞噬铁粉的能力去除。对玻璃和塑料制品的粘附性:巨噬细胞》树突状细胞》 B 细胞》 T=RBC ,常利用单核细胞这个特性将其分离。另外也可以用 Percoll 连续密度梯度离心法,四层:死细胞层(死细胞、血小板) 、单核细胞层、淋巴细胞层、红细胞和粒细胞层。 3、淋巴细胞亚群的分离①E 花环分离法成熟 T 细胞都表达 CD2 ,即 E 受体(绵羊红细胞受体) ②尼龙绵柱分离法利用 B 细胞易粘附于尼龙棉表面③补体细胞毒法剔除表达特定抗原的细胞,借助补体介导的细胞毒作用④亲和板分离利用特定抗原抗体结合⑤免疫磁珠⑥流式细胞仪分选淋巴细胞数量检测:正常人外周血 B 细胞占淋巴细胞的 8%-15% ,T 细胞占淋巴细胞的 60%-80% , NK 细胞占 5%-8% 。 1、表面 CD 抗原:所有 T 细胞表面均表达 CD3 、 TCR ;成熟 T 细胞均表达 CD2 ;部分表达 CD4/CD8 。 2、微量细胞毒试验利用抗原抗体反应激活补体依赖的细胞毒作用,以此作为显示系统 3、花环试验 B 细胞数量检测:表面标志物所有 B 细胞均表达 SmIgM , 成熟 B 表达 SmIgM 、 SmIgD 、 CD19 、 CD20 , B1 细胞 CD5+ 、 CD23- ; B2 则 CD5-/CD23+ B 细胞表面具有 IgG Fc 受体及补体受体, 用相应抗体致敏的红细胞( EA ) 能与 B 细胞结合成 EA 花环,或 EA 与补体结合后,借助补体受体与 B 细胞结合成 EAC 花环。
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