M KCl, 5 mM bME, 0.2 M Mg(CH3COO)2, 1 mM EGTAand 20 mM Tris–maleate, pH 6.8),加入ATP,配成浓度为10mM的溶液→混合液冰浴1h(同时搅拌) →10000g,离心15min →收集上清液,加入25倍的1 mM NaHCO3,冰浴15min. →12000g,离心15min →收集沉淀,加入5 倍buffer C (0.50 M KCl, 5mM bME and 20 mM Tris–HCl, pH7.5) →然后加入3 倍1 mM NaHCO3. MgCl2,调节至最终浓度为10mM →混合液冰浴过夜→22000g,离心15min →加入0.5 MNaCl, pH 7.0 →5000g,离心15min →收集上清液Р6Р2018/5/5Р3.ResultsР3.1 葡萄糖酸内酯诱导酸化后肌球蛋白的变化(pH值、肌球蛋白的浊度和粒度的变化、盐溶蛋白和Ca2+-ATPase 活性的变化、SH键及二硫键的变化、表面疏水性的变化、动态流变性特性的变化)Р如图所示,添加GDL后,随着时间的延长,肌球蛋白的pH降低;说明GDL有利于肌球蛋白的pH降低。Р图1、图2Р7Р2018/5/5Р图3图4Р图5?图6Р8Р2018/5/5Р如图所示,Turbidity(浊度) and particle size(粒度)随时间的延长逐渐升高;则说明随着pH的降低肌球蛋白聚合程度增加,这将有助于蛋白质网状结构的形成。Р9Р2018/5/5Р如图所示,添加GDL后,随着时间的延长,肌球蛋白的pH降低;说明GDL有利于肌球蛋白的pH降低;结果表明,高离子强度下的pH,导致肌球蛋白溶解性的降低。Р图7?图8Р10Р2018/5/5Р酸化的肌球蛋白中Ca2+-ATPase酶活的的降低,表明在酸性条件下,肌球蛋白变性。Р图9?图10
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