MTT实验幻灯片

瓒,用酶联免疫检测仪490nm波长处测定其吸光值,可间接反映活细胞数量。Р在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。РMTTР甲瓒РSDHРDMSOР490nm测定OD值Р6孔板细胞种板及转染Р长至80%左右收细胞Р各孔加1.75mL培基+0.25mL细胞悬液,轻吹混匀(十字交叉平移法+顺逆时针各10圈)Р种板Р转染РOpti-mem 125 uL?Lip 2000 5 uLРmix1РOpti-mem 125 uL?DNA 1 ugРmix2Р5minР5minР25minР培养12-24h,吸去6孔板中培基,加入1.75mL新鲜培基+250uL DNAР24-36h开始做MTT实验РMTT实验步骤(示例:miR-29c对细胞增殖的作用)Р6孔板转染24-48h后收细胞Р吸取10uL于细胞计数板中计数,计算所需细胞总量Р96孔板中每孔加入200 uL细胞悬液,约1000个细胞Р12h细胞贴壁后,每孔加入20uL 5mg/mL MTT,轻晃混匀,37℃培养4h,封口Р移去上清,每孔加入200uL DMSO(需避光),脱色摇床轻摇10minР酶标仪(490nm波长)测每孔OD值РMTT实验—96孔板加样Р比较转入miR-29c的细胞和空载细胞6d中的增殖能力,各做5个重复。Р边缘各孔加200uL hanks液,防止蒸发。Р30*200uL=6mL?30*1000=30000个РMTT实验步骤(示例:miR-29c对细胞增殖的作用)Р6孔板转染24-48h后收细胞Р吸取10uL于细胞计数板中计数,计算所需细胞总量Р96孔板中每孔加入200 uL细胞液,约1000个细胞Р12h细胞贴壁后,每孔加入20uL 5mg/mL MTT,轻晃混匀,37℃培养4h,封口Р移去上清,每孔加入200uL DMSO(需避光),脱色摇床轻摇10minР酶标仪(490nm波长)测每孔OD值