共价键交联在电极表面的方法。最常用的交联试剂为戊二醛,它能在温和条件下与蛋白质的自由氨基发生亲核反应。该固定法的优点是:结合牢靠,生物分子不易脱落,被广泛用于免疫分子膜及酶膜的制备:缺点是:膜的形成条件难以控制,形成的生物分子层比较疏松,扩散阻力大,易导致生物分子活性降低,且需要的生物样品的量也较多,造成浪费。5、自组装技术自组装单分子膜(Self-assembledmonolayers,简称SAMs)是分子在固/液或气/固界面,通过化学键自发吸附而形成的有序分子体系。优点是:制备条件温和,可适用于大多数水溶性蛋白质,不易使蛋白质失活,膜的有序度高、组成可根据需要人为控制,且稳定性好及缺陷少等。自组装膜结合了LB(LangmuirBlodgett)膜的分子有序性及化学吸附的稳定性,且自身具有生物亲性和与仿生性,因而在生物传感器、生物分子电子学等领域均具有广阔的应用前景【41。如Stevensl5】等人提出了一种通过巯基点击化学来生成被吸附物分子的方法,此法形成的被吸附物分子随后在金电极表面自组装。研究结果证明,这种新的合成方法在金电极表面所创建的自组装单分子膜具有高稳定性和低密度等优点。1.1.4血红蛋白(Hb)的直接电化学血红蛋白(Hb)是红细胞中一个重要的呼吸蛋白,是最为典型的一种氧化还原型蛋白,且廉价易得,一直是研究亚铁血红素蛋白质的电子转移反应的理想的模型。血红蛋白分子包括四个多肽链,每个多肽链包含一个电活性铁血红素组【6】,但是,血红蛋白的空间结构比较大,电活性中心被酶蛋白本体紧紧包裹住,难以接近电极的表面,所以Hb在普通电极上的电子转移速率比较低。目前,Hb直接电化学研究的一个重要应用就是用来制备无酶介的第三代传感器,作为类酶来检测一些生物小分子,如H202f7】和NO[8】等。近几年来许多材料已经用来修饰电极研究Hb的直接电化学行为,如一些无机材料、金属纳米颗
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