过发射光量子的形式跃迁至不同能级的基态,其又可经过振动弛豫的方式迁回至基态的最低能级。分子从最低能级三线态(T1)回迁至基态(So)有两种过程,一种是无能量释放的体系间跨越过程,另一种是有能量释放的放出光子过程,该过程的光子即为磷光【4。J。化合物在不同波长的紫外可见激发光照射下,可测定其发射光强度即得到该化合物的荧光激发光谱。通过固定激发光的波长和强度,可测定该化合物发射不同波长荧光时的荧光强度即可得到其荧光发射光谱。通过对荧光发射过程的了解,我们可以知道具有荧光的化合物其荧光发射光谱所具有的形状与其激发光波长无直接联系,因为分子接受光子能量被激发到哪一能级是随机不确定的,而荧光却总是从该分子最低能级的激发单线态开始以荧光的形式发射光子,个别化合物比较复杂是例外的。依据化合物的结构不同,其荧光激发光谱与荧光发射光谱均不同,可对化合物进行定性分析。若对物质的激发光波长、强度、温度和溶剂等因素固定,化合物在浓度较低的范围内,其浓度与荧光强度成线性关系,因此可对化合物进行定量分析。由于分子的荧光发射存在振动弛豫现象,可确定分子的荧光发射光能量比其吸收的激发光能量低,通过比较其激发与发射光波长,可得出荧光的发射波长总是长于其激发波长。又因为分子的激发单线态寿命与其荧光寿命处于同一数量级,均为10由~10‘‘S,若该时间段内无其他过程(能量转移)对荧光激发与发射过程干扰,处于激发态的分子均可通过发射荧光来返回至基态。1.2影响荧光探针特性的因素不同的荧光物质,其荧光发射光谱、荧光激发光谱和荧光特性各不相同,这由其内在的分子结构具有显著差异所决定的。一般来说,能够发射强荧光的化合物具有某些共性,比如:具有大的Ⅱ键共轭体系、具有平面结构且为刚性、最低的激发单线太Sl为Ⅱ或Ⅱ+以及某些取代基的『F影响等。Jtt#l-,环境因素也会对其荧光性能产生显著影响。环境因素主要包含:化合物浓度、温
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