M 1 2\rM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 B\r2000 bp 1638 bp\r1000 bp\r2000 bp\r750 bp 1638 bp\r500 bp\r1000 bp\r250 bp 750 bp\r500 bp\r1：载体 2：质粒 pCAMBIA 1307-FLAG-HA-CPK10\r图7 菌落PCR检测阳性克隆及双酶切验证\r2. 原生质体NSFC-REPORT-2014瞬时蛋白表达\r取拟南芥哥伦比亚野生型生长 28-32 d 的第三轮伸展的幼嫩叶片，用手术刀切碎，\r置于原生质体酶解液中，室温缓慢摇动 4-6 h，显微镜下观察原生质体状态，状态圆滑，\r可自由移动，叶绿体等内容物分布均匀，细胞边缘化较少，无大量破碎状态的原生质体\r可用于进一步转化。悬浮原生质体，利用 PEG 介导的原生质体转化方法将高纯度高浓\r度的 pCM1307-FLAG-HA-CPK10 质粒（CsCl2 密度梯度离心纯化）转入原生质体中，20℃\r过夜表达 10 h，分别用 FLAG 抗体（图 8A）和 HA 抗体（图 8B）进行杂交；western\r显影结果表明，通过 PEG 介导的原生质体转化可以成功的表达目的蛋白。\r第 9 页
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