过氧化氢含量的测定

关。过氧化氢也和细胞凋亡、细胞增殖等密切相关。\r看来过氧化氢在生物体内确实发挥重要作用呢,所以过氧化氢含量的测定就有重要\r的意义。我们下面简单介绍几种常用的测定过氧化氢的方法:\r一、二甲酚橙(xylenolorange)法\r这种方法在国内应用比较广泛,有明显的优势。\r原理:过氧化氢氧化二价铁离子产生三价铁离子,二甲酚橙(xylenolorange)高\r选择性的结合三价铁离子形成有色(紫色)产物,可用比色法在580nm处测定。从而\r实现对过氧化氢浓度的测定。\r由于二甲酚橙(xylenolorange)作为一种金属离子络合指示剂,与三价铁离子的\r结合有很高的选择性,也就是该方法有很好的特异性。同时该反应需要在酸性条件下进\r行,可以消除很多物质的干扰。\r二、硫酸钛比色法\r这也是国内一种比较常见的方法。\r原理:H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收。\r该方法原理简单易懂,但样本处理需要自备丙酮用来破碎细胞、匀浆组织和稀释液\r体样本。丙酮易挥发,而且易燃有毒,给操作带来一定困难,需要做好防护措施。\r三、探针法\r这是目前国外一种常用的测定过氧化氢含量的方法。\r原理:在辣根过氧化物酶(HRP)存在的条件下,特异的探针与过氧化氢反应,\r生成有色产物在570nm有最大光吸收,也可产生红色荧光(Ex/Em=535/587nm)。\r比色法与荧光法灵敏度不同,需要配制不同的标准曲线。\r该方法需要用到特异性的荧光探针,反应原理较前面2种复杂,但灵敏度很高,在\r荧光法中灵敏度可达40nM。\r四、过氧化物酶底物法\r这是一种国外不太常见的方法。\r原理:用一种独特的过氧化物酶底物测定溶液和细胞提取物中的过氧化氢,在辣根\r过氧化物酶(HRP)存在的条件下,过氧化氢氧化无色的过氧化物酶底物,产生强烈的\r蓝色。在650nm有特征吸收。