）花粉 母本Р（3）纤维素酶和果胶酶 农杆菌转化（或基因枪） 细胞壁Р（4）目的基因、标记基因、终止子 RNA聚合酶结合和识别的部位Р【考点】Q2：基因工程的原理及技术．Р【分析】基因工程技术的基本步骤：Р1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．Р2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．Р3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．Р4、目的基因的检测与鉴定：Р（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术．Р（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．Р【解答】解：（1）PCR技术依据的原理是DNA双链复制．Р（2）对大多数高等植物而言，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定，叶绿体转基因是属于细胞质遗传，具有母系遗传特点，而花粉中细胞质较少，受精卵中细胞质几乎来之卵细胞的，因此叶绿体转基因不会随着花粉遗传给后代．Р（3）植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，根据酶的专一性，可以利用纤维素酶和果胶酶 处理植物体细胞可得到原生质体，再通过农杆菌转化（或基因枪）法将目的基因导入原生质体，当原生质体再长出 细胞壁时，便可通过植物组织培养技术培养出相应的转基因幼苗．Р（4）一个完整的基因表达载体应该包括启动子、目的基因、标记基因、终止子等，启动子位于基因的首端，它是RNA聚合酶结合和识别的部位，有它才能启动基因转录．
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