对虾白斑综合症病毒极早期基因的研究

生物化学与分子生物学专业毕业论文[精品论文]对虾白斑综合症病毒极早期基因的研究关键词:对虾白斑综合症病毒极早期基因螯虾原代血细胞对虾养殖业基因表达摘要:对虾白斑综合症病毒(WSSV)是困扰对虾养殖业最主要的病原体,目前人们对它的侵染机制还缺乏了解。本研究在建立WSSV体外感染模型的基础上,应用蛋白质合成抑制剂来阻断病毒早期、后期基因的转录,然后通过基因芯片的方法筛选病毒的极早期基因,共获得了27个在极早期样品中特异表达的阳性探针,其中包括了24个候选的极早期基因(>100aa)。通过RT-PCR方法以及转录时相分析对这些候选基因进行验证,最终鉴定了16个WSSV的极早期基因(包括一个已知的极早期基因/e/),其中12个基因在WSSV基因组中呈基因簇分布。进一步分析表明WSSV的极早期基因编码了至少3类调控因子:包括4个具有转录激活能力的核蛋白WSV051,WSV069,WSV079,WSV100;1个细胞核内的蛋白激酶WSV083,以及1个定位于核膜与中心体上的泛素连接酶E3,WSV249。这些极早期蛋白可能通转录调控,翻译后修饰等方式对病毒的复制以及宿主细胞进行精密的调控,对它们的进一步研究将有助于揭示WSSV的感染机制,建立有效的防治方法。此外,由于DNA病毒极早期基因启动子是基因工程中强启动子的良好来源,本研究还对WSSV极早期基因的启动子区进行了克隆分析,并检验了它们启动基因转录的能力。结果表明wsv051,wsv069,wsv083,wsv108,wsv249的启动子在在昆虫细胞表现出很强的活性;而wsv249的启动子还可以在螯虾原代细胞中启动基因表达。因此这些启动子在构建基因工程表达载体,特别是适用于虾类的表达载体上有一定的应用前景。