0 d~45 d,透光率逐步增大,直至接近自然光照。遮阴时间根据接穗与砧木的愈合程度以及砧木的生长发育状况来确定,但一般不少于30 d。Р补水Р一般每天补水一次。Р去除自生根Р嫁接7 d后,每天检查接穗的自生根,若有,则及时用手术刀片剔除,直到嫁接后的45 d,保证接穗完全寄生在砧木上。Р去除砧木主茎Р停止去除接穗自生根后,切除砧木主茎离表土层10 cm以上的部分。Р后期管理Р去除砧木主茎后5 d,将嫁接体转移到正常生长条件下,直到接穗完全成熟,并收获G0代种子。Р突变体鉴定Р在嫁接后的G1~G3代都会出现不同类型的突变体。不同嫁接后代的种植参照NY/T 495、GB 4285、GB/T 8321和NY/T 496的规定执行。嫁接后代可采用形态鉴定、品质鉴定或分子鉴定等手段找到所需要的突变体。突变体类型按照GB 1352的规定执行。突变体鉴定参见附录A。Р(资料性附录)Р突变体鉴定РA.1 形态学鉴定Р将嫁接后收获的种子(G0)按组合播于盛有耕层土的塑料桶中,同时播种原接穗种子作为对照。出苗后开始陆续调查茎色、茸毛色、叶形、叶色、花色、花期、结荚习性、育性、分枝数、熟期等形态性状。收获后获得G1代种子,考察籽粒大小、籽粒颜色、种脐颜色等形态性状,根据性状表现鉴定出这些形态性状的突变体。在G2和G3代采用同样的方法对这些形态性状进行调查,并鉴定形态性状的突变体。РA.2 品质鉴定Р用近红外品质分析仪对G1~G3代收获的种子及原接穗种子测定蛋白质和油含量;用高效液相色谱仪测定维生素E、皂甙和异黄酮含量;用氨基酸分析仪测定各种氨基酸含量。通过比较分析,确定差异明显的品质性状突变体。РA.3 分子鉴定Р用CTAB法提取G1~G3代及原接穗幼嫩叶片总DNA,用RFLP、RAPD、SSR等引物进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖电泳后在凝胶成像仪上照相,根据扩增条带的多态性差异确定突变体。
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