度的要求有多高? ?样品的本底是否很复杂? ?有多少组份要分析? ?对分析的精确度、准确度等有多高要求? ?是否因是日常检验,而要求方法容易使用?Р第2页/共28页Р分离时要了解哪方面的情况?Р要分离(即制备)的样品量有多大? ?要分离的组份在样品中的含量很高? 还是微量? ?是否需要保持生物活性? ?对分离产物纯度的要求有多高? ?纯度或活性的鉴定如何完成?Р第3页/共28页Р一般的具体步骤Р先用一根短的色谱柱?用相对较高的流速?使用尽可能纯度高的标准品?先用高强度的洗脱液?调节k’值改变保留值?调节a值改变选择性?调节柱长度改变柱效及分离速度Р第4页/共28页Р使用文献方法Р色谱柱填料的种类、品牌是否相同??注意文献方法的流动相?是否损害色谱柱??如色谱填料品牌不同,需要调整流动相?注意色谱柱的规格:内径、柱长?需要调整流速、进样量?注意梯度条件?了解系统的滞后体积(梯度)Р第5页/共28页Р色谱方法转换Р如果没有与文献或要求相近的色谱柱?转换进样量Р转换流速Р第6页/共28页Р反相色谱的方法开发Р开发过程实例?色谱条件∶?色谱柱:C18,4mm×30mm?流动相:乙腈/水,不同的溶剂强度,60/40、50/50、40/60,由强渐弱?流速:2ml/min?样品:?①对羟基苯甲酸甲酯(Methyl Paraben)?②对羟基苯甲酸丙酯(Propyl Paraben)?③对羟基苯甲酸丁酯(Butyl Paraben)Р第7页/共28页Р改变容量因子 K'Р谱图Р第8页/共28页Р改变选择性∶aР通过改变流动相改变选择性?同样强度的不同溶剂Р改变色谱柱Р第9页/共28页Р离子型化合物的分离方式Р使用离子交换柱∶离子交换法?主要用于“强”阴、阳离子?使用反相柱?离子抑制色谱法?通过改变流动相的pH值,使样品成中性?离子对色谱法?加入“对离子”,使样品呈中性Р第10页/共28页
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