CR)对DNA分子的特定序列进行体外扩增。Р逆转录酶:依赖RNA的DNA聚合酶,它以RNA为模板,4种dNTP为底物,催化合成DNA,逆转录酶是多功能酶。① RNA指导的DNA聚合酶活性(RDDP)Р ②核糖核酸酶H活性(RNaseH)③ DNA聚合酶活性(DDDP)Р末端转移酶:在二价阳离子存在下,催化脱氧核糖核苷酸转移到单链或双链DNA分子的3¢末端-OH上。功能主要有:1、在载体或目的基因 3¢末端加上互补的同质多聚尾,形成人工粘性末端,便于DNA重组连接。2、用于DNA 3¢末端的同位素探针标记。РDNA连接酶:催化两个互补粘性末端或平末端双链DNA分子的5¢磷酸基团与3¢羟基形成磷酸二酯键,将具有相同粘性末端或平末端的DNA连接起来Р克隆载体应具备什么特征?Р 能自我复制并具较高的拷贝数。Р 分子量一般< 10Kb。Р 带有遗传筛选标记。Р 有适当的限制酶酶切位点,便于外源DNA的插入和筛选。Р请比较pBR322载体、pUC系列载体、l噬菌体载体、M13噬菌体载体和粘粒载体的结构特征和用途。Р pBR322载体和pUC系列载体的用途: ①用于保存和扩增< 2Kb目的DNA。Р ②构建cDNA文库。③目的DNA的测序。④作为核酸杂交时的探针来源。Р pBR322载体:由一系列大肠杆菌质粒DNA通过DNA重组技术构建而成的双链克隆载体,长为4.36Kb。含有一个能保证高拷贝自我复制的复制起始点(Ori),并装有四环素抗性(Tetr)基因和氨苄青霉素抗性(Ampr)基因供菌落筛选。两个抗性基因中分别含有BamH I和Pst I等限制酶的单一酶切位点,用于插入外源DNA片段РpUC系列载体:由pBR322质粒和M13噬菌体重组构建而成的双链DNA质粒载体。多克隆位点互为相反方向排列外,其它序列均相同。含Ampr,可供菌落筛选。载体中装入一个来自大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ
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