三分之一。 B、硫酸铵分段盐析、吊滤在不断搅拌下,提取液加入固体硫酸铵,完全溶解后静置,装入双层涤纶布袋吊滤过夜,得澄清滤液。在不断搅拌再加入硫酸铵,完全溶解后静置吊液过夜,次日拆袋得玻璃酸酶粗品。 C、盐析、透析将粗品溶于冰冷纯化水中,在不断搅拌下缓缓加入化学纯硫酸铵使完全溶解放置 10h 。然后除去液面脂肪,用虹吸出中层清液,并减压过滤,合并滤液,再缓缓加入化学纯硫酸铵,在 10℃左右放置过夜。次日吸上去层清液,得盐析沉淀物,收集沉淀。将沉淀溶于冰冷纯化水中,装入透析袋,放在磷酸盐-枸橼酸缓冲液进行透析,于 10℃左右透析 24h 后过滤,得透析液。 D、除热原、冻干将透析液于冰浴中冷却,加入磷酸钠,在不断搅拌下缓缓加入 20% 醋酸钙溶液, 并以氢氧化钠液调 pH 至8.5 ,继续搅拌,减压过滤,滤液以调 pH7.0 ,冷冻干燥,得无热原玻璃酸酶精品。②糜蛋白酶 A、牛胰粉碎、提取蛋白: ◆采集新鲜的牛胰,于-4℃以下冷藏保存。原料中加入 0.125mol/L 硫酸是为了防止胰蛋白酶激活作用,在此 PH 下酶原较稳定。◆在胰浆中加入 4倍量冰冷的硫酸,在2~8 ℃冷室中搅拌提取 3~5小时。◆将提取液用布袋进行固液分离,虑渣再用 1倍量冰冷的硫酸渍提取 1h,过滤, 残渣装袋后按照环保要求进行处理,合并 2次滤液。◆加硫酸铵,放 2~ 8℃冷室过夜,虹吸上层清液,底层沉淀加入适量硅藻土助滤, 减压过滤,合并上清液与滤液,得乳白色提取液。 B、分级盐析--制备糜蛋白酶原粗品: ◆提取液继续加固体硫酸铵,使达 70% 饱和度,放冷室过夜,次日吸去上清液弃去,下层沉淀抽滤至干。◆加3倍量冰水溶解,再加入滤饼重量一半的饱和硫酸铵溶液,在2 5℃下保温静置40~60小时,使糜蛋白酶原充分结晶,用布氏漏斗过滤至干,即为糜蛋白酶原粗制品。(滤液回收,联产时,滤液供制备胰蛋白酶原。)
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